熒光定量PCR儀的操作流程主要包括實驗前準備、反應(yīng)體系設(shè)計、PCR反應(yīng)條件設(shè)置、儀器開機與樣品放置、軟件操作與程序編輯等步驟。以下是對這些步驟的具體介紹：

　　

　　一、實驗前準備

　　

　　1、試劑準備：確保所有試劑和設(shè)備的質(zhì)量良好，避免對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。準備好所需的試劑和設(shè)備，包括PCR試劑盒、引物、模板DNA或RNA樣品、PCR儀等。

　　

　　2、實驗室環(huán)境：在超凈工作臺上進行所有步驟，使用75％乙醇或其他去污劑擦拭工作臺，避免表面污染。進入實驗室后需要佩戴一次性無菌口罩、無菌乳膠手套，盡量避免與同事交談，防止PCR模板污染。

　　

　　二、反應(yīng)體系設(shè)計

　　

　　設(shè)計反應(yīng)體系：根據(jù)實驗需要設(shè)計好PCR反應(yīng)體系，包括引物濃度、模板DNA或RNA濃度、試劑盒成分等。合理的反應(yīng)體系設(shè)計是保證實驗成功的關(guān)鍵。

　　

　　三、PCR反應(yīng)條件設(shè)置

　　

　　設(shè)定反應(yīng)條件：根據(jù)所用的PCR試劑盒和目標分子的特性，設(shè)置好PCR反應(yīng)的溫度、時間和循環(huán)次數(shù)等條件。合理的PCR反應(yīng)條件能夠提高PCR反應(yīng)的特異性和效率，減少非特異性產(chǎn)物的形成。

　　

　　四、儀器開機與樣品放置

　　

　　1、開啟儀器：開啟熒光定量PCR儀及其相連的電腦。點擊PCR儀上的“Eject”按鈕，放入已離心過的八連管樣品，再緩慢關(guān)閉接樣臺。

　　

　　2、放置樣品：將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml低緣八聯(lián)管，蓋上管蓋；或加入低緣96孔板，用光學(xué)級封膜封好。注意，必須帶一次性塑料手套，不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。

　　

　　五、軟件操作與程序編輯

　　

　　1、打開軟件：在電腦上打開與PCR儀配套的軟件，找到對應(yīng)的實驗程序文件夾。根據(jù)實驗需求，選擇或編輯相應(yīng)的程序。編輯過程中，確保所放樣品的地址以及信息準確無誤。

　　

　　2、保存程序：編輯完成后，點擊“File”選擇“Saveas”，將程序保存到相對應(yīng)的文件夾中，并務(wù)必修改程序名稱（包含日期、時間等信息）。隨后，通過軟件將編輯好的程序傳出到PCR儀上。

　　

　　總的來說，熒光定量PCR儀的操作雖然涉及多個步驟，但只要按照規(guī)范的流程進行，就可以有效地完成實驗并獲得可靠的結(jié)果。