只有了解
分光光度計基本結構,才能更好地使用分光光度計。分光光度計,又稱光譜儀,是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
分光光度計的儀器組成比較簡單,主要部件包括由光源、單色器、吸收池、檢測器以及數(shù)據(jù)處理及記錄系統(tǒng)等組成。
(1)單色器 單色器是分光光度計的核心部分,分光光度計儀器的主要光學特和工作特性基本上由單色器決定。它的作用是將光源發(fā)出的連續(xù)光譜色散成各種三。分光光度計中的單色器是一個完件--棱鏡或光柵外,還有人射和出射狹縫以及一組反鏡。根據(jù)工作光譜范圍、色散率、分辨率等性能指標的要求,可分別選用棱鏡或柵分光的單色器,也可采用濾光片分光的單色器等。
光片是zui簡單、zui廉價的色散元件,但單色性不好,使測定精度大大受到限現(xiàn)一般用來消除單色器的雜散光。棱鏡和光柵是目前廣泛使用的色散元件。棱可以作為從紫外到中紅外區(qū)的合適的色散元件,其主要缺點是色散波長的非線性布;而光柵是可以用于紫外、可見、近紅外范圍。光柵的主要缺點是有次級光譜擾分析,且雜散光的影響比棱鏡更大,故常配濾光片以去除雜散光;
(2)光源 分光光度計中光源為儀器提供連續(xù)輻射,理想的光源應在整個紫外見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜,具有足夠的輻射強度、較好的穩(wěn)定性、較長的使用命。
由于不同的光源波長范圍不同,因此,在分光光度計中在可見光區(qū)和紫外光區(qū)要使用不同的光源。目前儀器常用的光源有兩種:鎢絲燈、氫燈或氘燈。在可見光區(qū)、近紫外光區(qū)和近紅外光區(qū)常用鎢絲燈作為光源,波長范圍約為320-500nm。由于鎢燈的能量輸出大約隨工作電壓的四次方而變化,為了使光源穩(wěn)定,必須嚴格控制電壓。此外,為防止在高溫下工作時,鎢蒸氣不斷在冷的燈泡內壁沉,在鎢燈泡中引入了少量的碘蒸氣,即碘鎢燈,碘鎢燈相對普通鎢燈使用壽命長些。
在紫外光區(qū)多使用氫燈或氘燈作為光源,波長范圍約為185 ---400nm。應該指出,由于受石英吸收窗的限制,通常紫外光區(qū)波長的有效范圍為200~350nm。氘)…與氫燈的特性相似,但氘燈的紫外光發(fā)射強度比氫燈強2-3倍,壽命較長,成本較高;
(3)數(shù)據(jù)處理及記錄系統(tǒng) 數(shù)據(jù)處理及記錄系統(tǒng)包括放大器、A/D轉換單元、微型計算機等,;理和儀器自動控制。
檢測器產生的光電流以某種方式轉變成模擬信號,并線性地進行適度放大,放大了的模擬信號,反饋人A/D轉換單元zui終通過微型計算機進行適當?shù)臄?shù)據(jù)處理,并通過終端裝置顯示或打印出被測樣品的譜圖。
(4)檢測器 檢測器是一種光電轉換設備,將透過吸收池的光信號變成可測的電信號顯示出來。常用的有光電池、光電管或光電倍增管。光電倍增管是利用二次電子發(fā)射來放大光電流,放大倍數(shù)可高達108倍,是目前應用zui廣泛但價格較高的檢測器。較*儀器有采用二極管陣列作為檢測器。 二極管陣列檢測器不使用出射狹縫,在其位置上放-極管的線性陣列,則分光后不同波長的單色光同時被檢測。曼響應速度快,但靈敏度不如光電倍增管,因后者具有很高的放大倍數(shù);
(5)吸收池 吸收池(比色皿)是盛放樣品溶液的容器,具有兩個相互平行、透光、厚度的平面。主要有石英池和玻璃池兩種??梢姽鈪^(qū)用玻璃池,紫外光區(qū)須采用石英池。
吸收池可能有多種規(guī)格,典型的厚度是lcm。此外,每套吸收池的質料、厚度應*相同,以免產生誤差。吸收池上的指紋、油污或壁上的沉積物都會顯著地影響其透光性,因此在使用前務必*清洗。